Výskum: Zlepšenie chemickej stability a mikrobiálnej bezpečnosť lipozomálneho výživového doplnku

Výsledky a výstupy zmluvy o dielo č. 013/2025, zameranej na:

Zlepšenie chemickej stability a mikrobiálnej bezpečnosť lipozomálneho výživového doplnku

 

Cieľ 1. Zlepšenie chemickej stability výrobku so zameraním sa na elimináciu faktorov podmieňujúcich oxidačné reakcie prebiehajúce vo výrobku. 

 

Konkrétne výstupy a výsledky analýz: 

 

  1. a) Stanovenie obsahu kovov vo vstupných surovinách 

Zistili sme, že fosfolipidy používané v receptúre pre prípravu lipozomálnych výživových doplnkov sú zdrojom kovov. Atómová absorpčná chromatografia odhalila, že obsahujú od 18 do 19 mg/kg  železa, ktoré je hlavným prooxidantom mastných kyselín viazaných vo fosfolipidoch. Ďalej, obsah medi je na úrovni 3 až 4 mg/kg. Zistili sme, že úprava receptúry znížením obsahu kovov vo fosfolipidoch má významný vplyv na predĺženie stability výrobku. Prekážkou tohto riešenia je ekonomická náročnosť  z pohľadu ceny fosfolipidov obsahujúcich iba stopy kovov. Preto sme sa zamerali na riešenia ďalších faktorov, ktoré by mohli predĺžiť  oxidačnú stabilitu výrobku.

  1. b) Skúmanie vplyvu zmien podmienok výroby na antioxidačné vlastnosti finálneho výrobku 

Zistili sme, že podmienky výroby sú vhodne nastavené vzhľadom na požiadavky prípravy lipozómov. Pred adjustáciou do obalov sú lipozómy vákuované, čím sa v nich zásadne znižuje obsah kyslíka, ktorý sa so vzduchom zamiešal do lipozómov počas ich výroby. Z modelového experimentu sme zistili, že pri zamiešaní dusíka do lipozómov obsahujúcich alfa-tokoferol (primárny antioxidant) došlo v priemere k 3,2 násobne nižšiemu úbytku alfa-tokoferolu, oproti výrobku pripraveného klasickým miešaním  lipozómov v prítomnosti vzduchu. To viedlo k následnému zlepšeniu oxidačnej stability výrobku. V súčasnosti pracujeme, aj po skončení tejto zákazky, na vývoji takej technológie, ktorá by bola technologicky využiteľná v podmienkach firmy Adelle Davis.

  1. c) Výber vhodného antioxidačného systému na zlepšenie oxidačnej stability výrobku

Pri skúmaní antioxidačnej aktivity výrobku sme zistili nesúlad našich výsledkov s očakávanými. Vychádzali sme z poznatku zloženia receptúry výrobku, ktorá bola postavená na systéme antioxidantov Vitamín E a Vitamín C. Aspoň jeden z týchto antioxidantov musí byť základom každej kvalitnej receptúry lipozómov. Naše modelové pokusy nás doviedli k poznatku, že alfa-tokoferol (Vitamín E), ako primárny antioxidant, je stabilnejší pri oxidácii – starnutí výrobku ako kyselina askorbová (vitamín C). Preto sme sa zamerali na zastúpenie kľúčového antioxidantu vo výrobku - alfa-tokoferolu (Vitamín E). Po rozrazení emulzie lipozómov sme z nej izolovali lipofilnú frakciu, v ktorej je alfa-tokoferol rozpustný (Vitamín E). V nej sme pomocou kvapalinovej chromatografie (HPLC) analyzovali obsah alfa-tokoferolu. Pri analýze obsahu tokoferolov sme vychádzali z kalibračnej závislosti pre stanovenie α-tokoferolu (obr. 1). Údaje boli získané pri analýze štandardu α-tokoferolu za podmienok metódy pri vlnovej dĺžke 292 nm. Keď sme tieto údaje porovnali so štandardom a vzorkou lipozomálneho výrobku, dospeli sme k záveru, že ten obsahuje 0,9 % alfa-tokoferolu. To je zanedbateľné množstvo, ktoré nemá podstatný vplyv na stabilizáciu produktu. Ďalej sme sa zaujímali o zloženie čistého prípravku Vitamínu E, ešte predtým, ako sa stane súčasťou receptúry výrobku. Zistili sme, že 53,2 % z prípravku tvorí alfa-tokoferylacetát (obr. 2).

 

Obr. 2 HPLC analýza štandardu alfa-tokoferolu (svetlo modrá farba), alfa-tokoferylacetátu (fialová farba) a HPLC analýza prípravku vitamínu E používaného pri stabilizácii výrobkov (veľmi svetlo modrá)

 

Vitamín E v tele funguje ako antioxidant. Aby sa tento účinok prejavil, potrebuje voľnú -OH skupinu na benzénovom jadre. V prípade alfa-tokoferylacetátu je vodík na -OH skupine nahradený acetylovou skupinou. Takáto štruktúra nemôže vychytávať voľné radikály. Obe tieto látky, tokoferol aj tokoferylacetát majú vitamínovú aktivitu vitamínu E, napriek tomu, že iba tokoferol má voľnú -OH skupinu. Dôvodom je, že v ľudskom tele dochádza k premene tokoferylacetátu na tokoferol, a tým sa jeho účinok aktivuje. Tokoferylacetát samotný vo výživovom doplnku nemá antioxidačný účinok. Preto sme sa vrátili k receptúre výrobku a navrhli sme prídavok 1000 mg/kg alfa-tokoferolu s čistotou min. 95 %.

 

  1. d) Výber vhodného obalového materiálu používaného na balenie a skladovanie finálneho výrobku 

Vhodným obalovým prostriedkom je sklo s tmavým filmom, ktoré absorbuje UV-VIS žiarenie (a neprepustí ho do výrobku) a je skoro nepriepustné pre plyny a vodu. Spolu so správne navrhnutým uzáverom tvoria dokonalú ochranu pred extrémnymi faktormi a maximálne predĺžia stabilitu výrobku. Prekážkou tohto riešenia je ekonomická náročnosť  z pohľadu ceny a krehkosti skleneného obalového materiálu. Skúmali sme aktuálne  používaný obalový materiál firmou Adelle Davis a zistili sme, že zloženie PET fľaštičky  s čiernym farebným filmom má adekvátne absorpčné vlastnosti v UV-VIS oblasti. Z toho dôvodu ponúka prijateľnú variantu pre dlhodobú skladovateľnosť výrobku. 

  1. e) Skladovací experiment- hodnotenie oxidačnej stability 

Skladovací experiment potvrdil, že prídavok 1000 mg/kg alfa-tokoferolu s nahradením vzduchu za interný dusík má zásadný vplyv na stabilizáciu výrobku. V závislosti od prídavku alfa-tokoferolu (500 až 2000 mg/kg) v prítomnosti dusíka dochádza k 2 až 3,5 násobnému zlepšeniu oxidačnej stability výrobku. Čo znamená významné skvalitnenie výrobku. 














Cieľ 2. Zvýšenie mikrobiologickej bezpečnosť so zameraním sa na prediktívnu mikrobiológiu, následnú zmenu vnútorného prostredia výrobku a úpravy konzervačného systému. 

 

Konkrétne výstupy analýz: 

 

  1. Mikrobiologická analýza výrobkov po dobe spotreby a stanovenie vybraných faktorov jeho vnútorného prostredia výrobku 

 

V prvých fázach spolupráce sme sa zamerali na kvalitatívnu a kvantitatívnu analýzu mikrobiologickej kvality výrobkov po dobe spotreby. Výsledky zosumarizované v Tab. 1 potvrdili masívne mikrobiologické mikrobiologické znehodnotenie výrobkov. Celkové počty mikroorganizmov (CPM) dosahovali až desiatky miliónov KTJ/ml, koliformné baktérie (KFB) boli prítomné vo vysokých počtoch v šiestich vzorkách (z 9; v ostatné PM boli prerastené inými ako KFB) a vláknité huby prakticky neboli stanovené, okrem jednej vzorky s bombážou (2,7.10^5 KTJ/ml). Priemerné počty baktérií sa pohybovali  v rozmedzí 5,6 ±1,3 log KTJ/ml.

Z faktorov vnútorného prostredia, vysoké hodnoty av potvrdili všeobecne oblasť rastu pre kontaminačné mikroorganizmy, napriek nízkym hodnotám pH. Extrémne hodnoty pH boli tiež výsledkom naprodukovaných kyselím prítomnými mikroorganizmami. Z kvalitatívneho hľadiska bolo dôležité, že sme pomocou hmotnostenj spektrometrie (MALDI-TOF) identifikovali vybrané kolónie. Prítomné boli predovšetkým grampozitívne laktobacili a bližšie neurčená kvasinka.

Pre porovnanie sme z obdobia 2023 – 2024 vyhodnotili mikrobiologické výsledky z iných laboratórií, ktoré tiež potvrdili vysoké počty CPM, napríklad vo výrobku Lipozomálny vitamín C v priemere  7,0 log KTJ/ml (v počte vzoriek n = 13); Lipozomálny vit. C Junior priemerné CPM dosahovali 6,3 log KTJ/ml (n = 13); v prípravku Železo s vit. C bolo prítomných v priemere 5,8 log KTJ/ml (n = 14); B-komplex 6,8 log KTJ/ml (n = 14);   Magnézium: 6,8 log KTJ/ml (n = 14); Lyzín 6,3 log KTJ/ml (n = 14) a podobné hodnoty vykazovali aj ostatné výrobky.

Horeuvedené výsledky jednoznačne naznačili, jednak vysokú kontamináciu, ktorá mohla pochádzať zo surovín alebo z prostredia  výroby, zo vzduch a lebo z kontaminovaných plôch zariadení a pomôcok. Kontaminačné  mikroorganizmy aj napriek nízkemu pH a koncentrácii používaných konzervačnej látky, sorbanu draselnému (max. 2 000 mg/l), zamerané skôr na kvasinky a vláknité huby (plesne) mali dostatok času na pomnoženie a znehodnotenie produktu. 

V ďalšej etape spolupráce sme sa zamerali na mikrobiologickú analýzu vybraných surovín a obalového materialu. Nakoľko identifikované laktobacili dokážu rásť aj pri nízkom pH, náš prístup spočíval aj v tom, že neskôr ich budeme riešiť vo vžťahu ku aktivite vody (av). 



Vzorky

Názov

Trvanlivosť

av

pH

CPM

KaVH

KFB

Identifikované MO (MALDI-TOF)

(KTJ/ml)

(log KTJ/ml)

(KTJ/ml)

(KTJ/ml)

AD 01

Vit C Junior

16.1.2024

0.963

4.15

1.30E+05

5.1

< 1 KTJ/ml

8.00E+03

Lactobacillus pentosus

AD 02

Vyhodnotenie

8.5.2024

0.95

4.1

4.40E+04

4.6

< 1 KTJ/ml

Prerastené PM

Lactobacillus pentosus

AD 03

Vit D3

27.3.2024

0.967

3.85

7.90E+04

4.9

< 1 KTJ/ml

1.40E+04

Staphylococcus, Lactobacillus

AD 04

Mg SHOT

17.7.2024

0.96

3.48

3.60E+04

4.6

< 1 KTJ/ml

2.80E+04

Lactobacillus sp.

AD 05

Muzuri Vit C

28.10.2025

0.945

4.53

2.10E+07

7.3

< 1 KTJ/ml

1.30E+06

Lactobacillus sp.

AD 06

Lipozomálny B- komplex

27.3.2024

0.963

4.01

1.20E+05

5.1

< 1 KTJ/ml

2.10E+04

Lactobacillus sp.

AD 07

Lipozomálny condro komplex

31.7.2024

0.956

3.42

1.90E+04

4.3

< 1 KTJ/ml

Prerastené PM

Lactobacillus paracasei

AD 08

neoznačená vzorka

neuvedené

0.946

4.36

5.30E+07

7.7

< 1 KTJ/ml

2.60E+07

Lactobacillus pentosus

AD 09

neoznačená vzorka

neuvedené

0.96

2.72

9.30E+05

6.0

2.70E+05

Prerastené PM

kvasinka

 

Priemer

0.96

3.85

3.62E+05

5.56

 

SD

0.008

0.6

2.07E+01

1.32

Tabuľka 1. Výsledky mikrobiologických analýz a stanovenia aktivity vody (av) a pH vo výrobkoch po dobe spotreby

Vysvetlivky: CPM – celkový počet mikroorganizmov; KaVH – kvasinky a vláknité huby; KFB – koliformné baktérie; SD – smerodajná odchýlka; PM – Petriho miska

Tabuľka 2. Výsledky mikrobiologických analýz a stanovenia aktivity vody (av) a pH v surovinách a vo výrobkoch 

Vzorka

Názov

pH

av

CPM (KTJ/g)

CPM

(log KTJ/g)

KaVH

(KTJ/g)

KFB (KTJ/g)

PP Lbc (KTJ/g)

C

Lecitín (prášok) 

N/A

N/A

< 10 KTJ/g

< 10

< 10

< 10

D

Chondroitín (prášok)

N/A

N/A

4.90E+02

2.7

< 10

< 10

< 10

E

Banánová príchuť (prášok)

N/A

N/A

< 5 KTJ/g

< 10

< 10

< 10

F

Golden Chondro tekutina - 20.3.2025

3.68

0.973

1.20E+08

8.1

< 1 KTJ/ml

< 10 KTJ/ml

> 30 000

G

Golden Chondro tekutina - 3.4.2025

4.62

0.977

1.00E+05

5.0

53

68000

> 300

H

Lipo magne B6

3.52

0.976

4.20E+01

1.6

< 1 KTJ/ml

17

51

I

Lipo vit C

4.31

0.975

5.50E+07

7.7

13

> 300

J

Lipo Zinok

3.74

0.976

2.10E+04

4.3

52

700

710











Vysvetlivky: CPM – celkový počet mikroorganizmov; KaVH – kvasinky a vláknité huby; KFB – koliformné baktérie; PP Lbc – pravdepodobný počet laktobacilov

  1. Mikrobiologická analýza výrobkov surovín a obalového materiálu 

 

Výsledky k tejto časti surovín, medziproduktov sú zosumarizované v Tab. 2. 

  1. Z nich je možné dedukovať, že práškové suroviny až na chondrotoín vykazovali CPM pod hodnotou limitu kvantifikácie. Ten obsahoval asi 500 KTJ/g CPM, ktoré po rozpustení mali významný potencial pre rast: vo vzorkách F, G CPM dosiahol až 5 a 8 log KTJ/g, v poradí. Zachytili sa v nich aj koliformné baktérie a laktobacili. Vysoké počty boli stanovené aj v ďalších dvoch vzorkách I a J. Hodnoty av boli v oblasti poddporujúcej rast mikroorganizmov.
  2. CPM bol vo fľašiach všeobecne nízky, max. 6 KTJ/í ml, čo potvrdila aj skúška s fľašou z kancelárie, ktorá obsahovala vyše 40 KTJ/9 ml výplachovej vody. Nulové hodnoty v 9 ml sme stanovili vo fľaši z novootvoreného balíka a vo fľaši po ozonizácii (Tab 3.).

 

Tabuľka 3. Celkový počet mikroorganizmov vo fľaši stanovený výplachovou metódou

Vzorka

Názov

CPM 

A

Sklo v sklade

6 KTJ/9 ml

B

Fľaša z otvoreného balíka 

0 KTJ/9 ml

C

Fľaša z nového balíka

2 KTJ/9 ml

D

Kancelárska vzorka fľaše

41 KTJ/9 ml

E

Fľaša vo výrobe po ozonizácii

0 KTJ/9 ml

E

stará fľaša – na sklade, balená bežnou technológiou

1 KTJ/9 ml

F

nová fľaša z výroby - zakupená pred tyždňom

6 KTJ/9 ml



  1. Mikrobiologická analýza výrobku a stanovenie vybraných faktorov jeho vnútorného prostredia výrobku 
  1. V prvej sérii dodaných vzoriek lipozomálneho Vitamínu C a Condrocomplexu sme stanovili dva faktory vnútorného prostredia, aktivitu vody (av) a pH, ktoré ná poskytli informácie o potencionálnej podpore prítomných kontaminačných mikroorganizmov. Zistené hodnoty pH u týchto výrobkov medzi 4,14 až 4,55 sa javili ako schopné prispieť k inhibícii rastu baktérií. Na druhej strane av v rozmedzí 0,97 až 0,98 považujeme za vysoké a podporujúce časti gramnegatívnych baktérií a rast prakticky všetkých grampozitívnych baktérií, kvasiniek a vláknitých húb (plesní). 
  2. Ďalej sme pokračovali meraním av a pH v pokazených vzorkách, ktoré sú uvedené v nasledujúcej tabuľke 4.

Tab. 4. Namerané hodnoty av a pH v znehodnotených vzorkách

Názov

Trvanlivosť

av

pH

Vit C Junior

16.1.2024

0.963

4.15

Lyzín

8.5.2024

0.95

4.1

Vit D3

27.3.2024

0.967

3.85

Mg SHOT

17.7.2024

0.96

3.48

Muzuri Vit C

28.10.2025

0.945

4.53

 

V nich sme podobne stanovili relatívne nízke hodnoty pH a síce nižšie, ale stále vysoké hodnoty av, pri ktorých výrobky podporovali rast odolnejších grampozitívnych baktérií, kvasiniek a vláknitých húb. Tieto vzorky boli spolu s ďalšími podrobené mikrobiologickým analýzam na viaceré skupiny indikátorových skupín mikroorganizmov. Pri priemernej av = 0,96 ± 0,01 a pH 3,9 ± 0,6 sme vo všetkých vzorkách zistili vysoké počty, na úrovni viac ako 360 000 KTJ/ml (5,6 ± 1,3 log KTJ/ml). Prítomné boli aj koliformné baktérie. Hmotnostnou spetrometriou na MALDI TOF sme identifikovali kyslomliečne baktérie rodu Lactobacillus, druh L. pentosus, L. paracasei a kvasinky. Tieto nálezy boli smerodajné, nakoľko laktobacili tolerujú nízke pH a rovnako rastú pri zistených hodnotách av. O všetkých výsledkoch sme zástupcov fmy Adelle Davis priebežne informovali.

Po kvantitatívnych a kvalitatívnych analýzach výrobkov použitých surovín, resp. zložiek sme v ďalšej fáze pristúpili k návrhu zmien vnútorných faktorov prostredia, zloženia produktov v zmysle s cieľom vytvoriť, prostredie, ktoré nebude podporovať rast potencionálnych kontaminantov. Nakoľko vo všetkých prípadoch znehodnotených vzoriek boli prítomné laktobacili, sústredili sme sa na zníženie av pod úroveň 0,90, čo je minimálna hodnota pre ich rast. Navrhli sme aj radikálnejšie zloženie vnútorného prostredia, avšak narazili sme na konzistenčné problémy, ktoré nemohli byť akceptovateľné. Hodnoty pH sme vo výrobkoch ponechali na pôvodnej úrovni tak, aby spolu s av < 0,90 spoločne vytvárali väčšiu bariéru aj pre prípadné ostatné kontaminanty. Finálne nastavenie av výrobkov bolo komunikované so zástupcami fmy Adelle Davis  a založené na prídavkoch glycerolu a sorbitolu, ktoré sa okrem zníženia aktivity vody podieľajú aj na ochrane vitamínu C prítomného vo výrobkoch. Presné koncentrácie v tejto správe neuvádzame, výrobca je s nimi oboznámený.

 

  1. Skladovacie testy

Mikrobiologickú kvalitu Lipozomálneho vitamínu C s pôvodným nastavením pH reprezentujúceho aj ostatné výrobky sme overovali v dvoch skladovacích testoch  

  1. s prídavkom konzervačnej látky (sorban + bezoan) bez úpravy av
  2. s prídavkom konzervačných látok s úpravou aktivity vody

V prvom prípade skladovacieho testu (a.) sú výsledky zhrnuté v Tab. 5. Z výsledkov a grafického znázornenia rastu kontaminantov počas skladovacieho testu (Obr. 1) vyplynulo, že výrobok napriek obsahu konzervačných látok umožňuje kontaminantom prakticky lineárne zvyšovať počty s rýchlosťou 0,2 až 0,25 log KTJ/ml/d, pričom vyššou rýchlosťou rástli počty laktobacilov. Z prakticky rovnakých smerníc priamok na Obr. 1 by mohlo tiež vyplynúť, že ten rast laktobacilov mhol by byť reprezentovaný hodnotami stanovenými aj ostatnými kultivačnými metódami, minimálne CPM ale pravdepodobne aj s KFB. 

V každom prípade zo skladovacieho testu vyplynulo, že konzervačný systém bol neúčinný, výrobol by sa stal nepoužiteľný už po cca 20 dňoch skladovanie pre teplote okolitého prostredia (v našom prípade 22 °C). Preto sme v ďaľom prikročili k vytvoreniu ďalšej prekážky rastu mikroorganizmov, k zníženiu aktivity vody vnútorného prostredia výrobku

 

Tab. 5. Priemerné mikrobiologické ukazovatele (n = 3) prvého skladovacieho testu Lipo vitamínu C bez úpravy aktivity vody

Dátum

Počet dní 

CPM

KFB

PP Lbc

pH

av

(log KTJ/ml)

30.4.2025

0

0.60

0.13

0.38

4.47

0.97

6.5.2025

6

2.24

2.01

1.29

4.54

0.93

12.5.2025

12

2.56

2.51

2.51

4.52

0.95

19.5.2025

19

5.65

4.59

5.68

4.52

26.5.2025

26

6.30

5.62

6.36

4.50

0.95

 

Obr. 1. Grafické znázornenie rastu baktérií v Lipozomálnom vitamíne C počas akladovacieho testu.

  1. Skladovací test Lipozomálneho vit. C s prídavkom konzervačných látok a s úpravou aktivity vody

Výsledky skaldovacieho testu s Lipozomálnym vitamínom C s novým nastavením vnútorného prostredia sú uvedené v Tab. 6. a poukazujú na mikrobiologické ukazovatele na úrovni limitu kvantifikácie kultivačných metód, na úrovni jednotiek KTJ/ml.

 

Tabuľka 6. Mikrobiologické ukazovatele a hodnoty av a pH vo výrobku Vitamín C s novonastavenou av (glycerol + sorbitol) a pH.

Dátum

CPM

KaVH

KFB

PP Lbc

pH

av

19.08.2025

1

<1

1

3

4,51

0,902

25.08.2025

<1

<1

1

1

4,48

0,903

08.09.2025

<1

<1

1

1

4,5

0,901

15.09.2025

2,5

<1

2

2,5

4,48

0,902

22.09.2025

-

-

-

-

4,5

0,903

29.09.2025

<1

<1

<1

<1

4,49

0,902

14.10.2025

1

<1

<1

<1

4,56

0,902

CPM – celkový počet mikroorganizmov, KaVHP – kvasinky a vláknité huby, KFB – koliformné baktérie, PP Lbc – predpokladaný počet laktobacilov

 

Výsledky potvrdili, že pri kombináciach pH a av uvedených v Tab. 6 výrobok vykazuje stabilitu mikrobiologickej kvality. Nízke hodnoty sa držia už minimálne dva mesiace. S najvyššou pravdepodobnosťou môžeme predpokladať, že aj ostatné výrobky takto nastavené si udržia dobrú mikrobiologickú kvalitu, samozrejme ak nedôjde k nejakému zásadnému porušeniu zásad správnej výrobnej a hygienickej praxe. 

 

Záver

Záverom konštatujeme, že kombináciou prídavkov glycerolu a sorbitolu sme úspešne nastavili vnútorné prostredie výrobkov, vrátane alternatívnej možnosti použitia vyšších koncentrácií. Ak sa počas výroby starostlivo použijú príslušné koncentrácie glycerolu a sorbitolu a dosiahnu hodnoty av < 0,90 a pH < 4,5, takéto výrobky môžeme z mikrobiologického hľadiska považovať za bezpečné a bez potenciálu kazenia počas doby spotreby. V skupinách ostatných výrobkov je možné na základe zloženia uplatniť ten istý princíp, vrátane overovania deklarovanej doby spotreby skladovacími testmi. V špecifických prípadoch doporučujeme analyzovať a zhodnotiť opatrenia minimalizujúce kontamináciu výrobkov z výrobného prostredia ale možného prenosu mikrobiologických kontaminantov zo surovín alebo jednotlivých zložiek.

 

Všetky mikrobiologické analýzy, vrátane tých, ktoré správa neobsahuje, vykonali: 

Martina Koňuchová, Ing., PhD. 

a Zuzana Matejčeková, Ing., PhD.

Za koncept spolupráce a správnosť výsledkov zodpovedá: 

Ľubomír Valík, prof. Ing., PhD. 

Správu vypracoval Ľubomír Valík, prof. Ing., PhD. 

 

Všetky analýzy zamerané na zlepšenie chemickej stability výrobku, vrátane tých, ktoré správa neobsahuje, vykonali: 

Ondrej Hruška, Ing., 

Kristína Masnicová, Ing., 

Erika Hrašková, Ing.,

a František Kreps, doc. Ing., PhD.

Za koncept spolupráce a správnosť výsledkov zodpovedá: 

František Kreps, doc. Ing., PhD.